获得性耐药性是癌症治疗中的一个重大挑战，这强调了发现和开发新治疗策略的必要性。我们在这里报告了由稀土金属镨（Pr）和巯基吡啶氧化物（MPO；吡啶硫酮）组成的小配位配合物的抗癌活性机制。将癌细胞暴露于相对较低浓度的结合物 Pr-MPO (5 µM) 中，会以不依赖于 p53 的方式显着损害细胞存活，且与耐药表型无关。从机制上讲，Pr-MPO 诱导的细胞死亡是不依赖于 caspase 的，不能被 necrostatin 抑制，但与自噬标记物的出现有关。然而，进一步的分析揭示了不完全的自噬通量，从而表明溶酶体机器的完整性发生了改变。支持溶酶体靶向活性的数据表明，溶酶体 Ca2+ 积累和碱化增加，这与胞质酸化（pHc 从 7.75 降至 7.00）同时发生。与此同时，参与被动糖原分解的糖苷酶 α 酸 (GAA) 溶酶体活性的增加与 Pr-MPO 治疗后葡萄糖储备的快速消耗相关。这与 TCA 循环中间体的快速崩溃、NAD /NADH 的损失以及丙酮酸脱氢酶 (PDH) 活性的增加以补偿丙酮酸的损失有关。添加外源丙酮酸可挽救细胞存活。值得注意的是，Pr-MPO 引发的溶酶体损伤和代谢灾难表明存在 Zn2 介导的细胞毒性，Zn2 螯合剂 TPEN 阻断 Pr-MPO 介导的抗肿瘤活性的能力证实了这一点。总之，这些结果凸显了小分子镧系元素缀合物能够靶向细胞的废物清除机制以及 Zn2 介导的癌细胞执行的线粒体代谢，这可能具有针对高代谢活性癌症的治疗潜力。© 2024。作者。

我们之前开发了一种针对 CTLA-4 的纳米抗体，并证明它可以在体外增强抗肿瘤 T 细胞反应；然而，将 T 细胞注射到癌症模型中后产生的反应通常很弱且短暂。在这里，我们探讨了将我们的纳米抗体与 IL-12 融合是否能够使其在暴露于未成熟树突状细胞和肿瘤细胞融合后诱导更强、更持久的 T 细胞免疫反应。融合蛋白增强了 CD8 T 细胞对肿瘤的反应在体外将 T 细胞注射到携带不同类型异种移植物的小鼠体内后，产生了更强、更持久的免疫反应。我们的体外和体内结果表明了我们的纳米抗体-白细胞介素融合系统的抗癌潜力，并支持其临床应用这种融合方法适用于各种纳米抗体。© 2024。作者。

MECOM 基因座是在高级别浆液性卵巢癌 (HGSOC) 中频繁扩增的基因。然而，检查 MECOM 转录本、患者预后及其在调节肿瘤免疫微环境 (TIME) 中的作用之间的关联的研究仍然很少，特别是在大型队列中。本研究评估了 GTEx/TCGA 联合数据库中 352 名 HGSOC 患者和 88 名正常卵巢组织中 MECOM 转录本的表达。使用 UCSC 基因组浏览器、Ensembl 和 NextProt 等资源，鉴定了与 MECOM 的经典蛋白质亚型相对应的两个转录本。采用 Cox 比例风险回归分析、Kaplan-Meier 生存曲线和综合 TIME 评估算法来阐明这些转录本的表达水平与患者预后和 TIME 状态之间的联系。分析了两种蛋白质异构体的染色质免疫沉淀测序 (ChIP-seq) 数据以及靶向沉默后的 RNA 测序数据，以确定不同转录因子的潜在调控靶点。 MECOM 亚型转录物的表达升高与 HGSOC 患者的较差生存率相关，这可能是通过调节癌症相关成纤维细胞 (CAF) 和免疫抑制细胞群来实现的。相比之下，较高水平的EVI1亚型转录物与生存率提高有关，这可能是由于CD8 T细胞、巨噬细胞的调节以及JUN蛋白表达或其下游基因的DNA结合活性的降低所致。研究发现，源自 MECOM 的多种蛋白质亚型通过特定机制对卵巢癌患者的生存和肿瘤发展产生不同的影响。研究疾病发病机制的分子机制并在剪接变异亚型水平上识别潜在的药物靶蛋白被认为至关重要。© 2024。作者。

疟疾相关的急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征（MA-ALI/ARDS）是恶性疟原虫感染的致命并发症，部分由巨噬细胞募集和极化引发。据报道，铜暴露会增加疟疾感染的风险，而铜积累引起的铜凋亡会引发 M1 巨噬细胞极化。因此推测铜凋亡可能是 MA-ALI/ARDS 发病机制中的关键介质，但其潜在机制仍不清楚。本研究旨在探讨铜凋亡在小鼠 MA-ALI/ARDS 严重程度中的作用。我们利用感染伯氏疟原虫 ANKA 的雌性 C57BL/6 小鼠建立 MA-ALI/ARDS 实验模型，并用有效的铜离子载体双硫仑 (DSF) 或铜离子螯合剂四硫代钼酸盐 (TTM)。在体外用受感染的红细胞 (iRBC) 刺激的 RAW 264.7 巨噬细胞也用 DSF-CuCl2 或 TTM-CuCl2 进行靶向，以进一步研究其潜在机制。我们的研究结果表明，铜的量和在实验性 MA-ALI/ARDS 小鼠的肺组织中，SLC31A1（铜流入转运蛋白）和 FDX1（铜凋亡的关键正调节因子）的表达显着降低，但 ATP7A（铜流出转运蛋白）的表达显着减少。与感染伯氏疟原虫 ANKA 的对照组相比，给予 DSF 的小鼠表现出寄生虫血症/肺寄生虫负荷、支气管肺泡灌洗液 (BALF) 中的总蛋白浓度、肺湿/干重比、血管渗漏和肺组织的病理变化。引人注目的是，接受 DSF 治疗的实验性 MA-ALI/ARDS 小鼠还表现出铜水平、SLC31A1 和 FDX1 表达、CD86、CD68、SLC31A1-CD68 和 FDX1-CD68 巨噬细胞数量以及信使 RNA (mRNA) 水平显着升高。肺组织中的促炎细胞因子（肿瘤坏死因子 [TNF-α] 和诱导型一氧化氮合酶 [iNOS]），但体重、存活时间、ATP7A 表达、CD206 巨噬细胞数量和 mRNA 水平显着下降抗炎细胞因子（转化生长因子 β [TGF-β] 和白细胞介素 10 [IL-10]）。相比之下，TTM 治疗逆转了受感染小鼠的这些变化。同样，体外实验显示，在 DSF-CuCl2 靶向的 iRBC 刺激的 RAW 264.7 细胞中，SLC31A1、FDX1、CD86、TNF-α 和 iNOS 的 mRNA 水平显着升高，但引发了 mRNA 水平的显着下降。 ATP7A、CD206、TGF-β 和 IL-10。相比之下，TTM-CuCl2 治疗也逆转了 iRBC 刺激的 RAW 264.7 细胞中的这些趋势。我们的数据表明，用 DSF 激活铜凋亡会部分诱导肺巨噬细胞的 M1 极化，从而加重 MA-ALI/ARDS 的严重程度，而抑制相反，TTM 治疗铜凋亡可通过促进巨噬细胞 M2 极化来改善 MA-ALI/ARDS 的严重程度。我们的研究结果表明，阻断铜凋亡可能是治疗 MA-ALI/ARDS 的潜在治疗策略。© 2024。作者。

近年来，免疫治疗作为肿瘤治疗的新领域发展迅速。然而，由于肿瘤细胞的免疫逃避机制、诱导免疫抑制肿瘤微环境（TME）、减少抗原递送等，肿瘤免疫治疗的疗效并不理想。CRISPR/Cas9基因编辑技术可以精确修饰免疫和肿瘤细胞通过针对免疫检查点分子和免疫调节基因来提高免疫治疗的疗效，从而得到了巨大的发展和应用。目前的临床试验中，CRISPR/Cas9在肿瘤免疫治疗中的应用还存在许多障碍，如确保基因编辑的准确性和安全性、克服过度反应的免疫反应、解决体内药物递送的挑战等。在此我们对CRISPR/Cas9在肿瘤治疗中的应用进行系统综述，以解决上述存在的问题。我们专注于免疫调节基因的CRISPR/Cas9筛选和鉴定、免疫检查点分子的靶向、免疫调节剂的操作、增强肿瘤特异性抗原呈递和调节免疫细胞功能。其次，我们还重点介绍了CRISPR/Cas9在动物模型和各种递送系统中的临床前研究，评估了CRISPR/Cas9技术在肿瘤免疫治疗中的有效性和安全性。最后，提出了将 CRISPR/Cas9 敲低与其他免疫疗法相结合的潜在协同方法。这项研究强调了 CRISPR/Cas9 重塑肿瘤免疫治疗格局的变革潜力，并为癌症患者的新治疗策略提供了见解。© 2024。作者。

目前尚不清楚肠道干细胞（ISC）是否以及如何适应炎症暴露，以及这种适应是否会留下影响其随后再生的疤痕。我们在明确的临床相关急性胃肠道移植物抗宿主病 (GI GVHD) 模型中研究了炎症对 Lgr5 ISC 的影响。利用单细胞转录组学以及类器官、代谢、表观基因组和体内模型，我们发现 Lgr5 ISC 经历代谢变化，导致琥珀酸的积累，从而重新编程其表观基因组。这些变化降低了 ISC 在连续类器官培养物中以及在连续移植后的体内分化和再生的能力。此外，尽管最初的炎症暴露得到了解决，但 ISC 的体内再生能力却下降，这表明炎症遭遇引起的适应不良影响仍然存在。因此，炎症以一种持续存在的方式在 ISC 的表观基因组上留下印记，并影响它们适应未来压力或挑战的敏感性。版权所有 © 2024 作者。由爱思唯尔公司出版。保留所有权利。

研究免疫介导的宿主损伤的人体模型很少。在这里，我们利用 GeoMx 空间多组学平台分析了 COVID-19 胰腺尸检样本中免疫细胞的变化，揭示了促炎巨噬细胞的积累。对暴露于严重急性呼吸综合征冠状病毒 2 (SARS-CoV-2) 或柯萨奇病毒 B4 (CVB4) 病毒的人类胰岛进行单细胞 RNA 测序 (scRNA-seq) 分析，发现促炎巨噬细胞和 β 细胞焦亡被激活。为了区分病毒和促炎巨噬细胞介导的 β 细胞焦亡，我们开发了人多能干细胞 (hPSC) 来源的血管化巨噬细胞胰岛 (VMI) 类器官。与单独培养的细胞相比，VMI 类器官在 β 细胞和内皮细胞中表现出增强的标记表达和功能。值得注意的是，VMI 类器官内的促炎巨噬细胞诱导 β 细胞焦亡。机制研究强调 TNFSF12-TNFRSF12A 参与促炎巨噬细胞介导的 β 细胞焦亡。这项研究建立了 hPSC 衍生的 VMI 类器官作为研究免疫细胞介导的宿主损伤的重要工具，并揭示了病毒暴露期间 β 细胞损伤的机制。版权所有 © 2024 作者。由爱思唯尔公司出版。保留所有权利。

组织工程的基本目标是在功能上恢复或改善受损的组织或器官。在这里，我们使用体内异种移植临床前急性损伤模型在小肠中解决这个问题。我们研究了由人类多能干细胞 (hPSC) 产生的人类肠道类器官 (HIO) 修复受损小肠的治疗能力。我们假设 HIO 的细胞复杂性使其能够维持跨壁植入。为了测试这一点，我们开发了一种啮齿动物损伤模型，通过腔内递送，我们证明了碎片化的 HIO 在修复后植入、增殖并持续存在于整个肠道中。不仅观察到粘膜层的恢复，而且还在肌层和血管内皮中观察到显着的合并。进一步的分析表征了再生区域内存在的持续细胞类型、近端区域化的保留以及新上皮的功能。这些发现证明了间充质对于肠道损伤修复的治疗重要性。版权所有 © 2024 Elsevier Inc. 保留所有权利。

肉瘤是罕见的恶性肿瘤，有 100 多种不同的组织学亚型。它们的稀有性和异质性对确定有效的治疗方法提出了重大挑战，并且批准的治疗方案显示出不同的反应。需要新颖、个性化的治疗方法来改善患者的治疗效果。患者来源的肿瘤类器官 (PDTO) 可模拟一系列恶性肿瘤的肿瘤行为。我们利用 PDTO 来表征肉瘤的耐药性和敏感性，收集了来自 126 名患者的 194 份标本，涵盖 24 种不同的肉瘤亚型。我们的高通量类器官筛选流程测试了单一药物和组合，并在手术后一周内得出结果。药物敏感性与肿瘤亚型、治疗史和疾病轨迹等临床特征相关。 PDTO 筛查可以促进最佳药物选择并反映肉瘤患者的治疗结果。我们可以为 59% 的标本确定至少一种 FDA 批准或 NCCN 推荐的有效治疗方案，证明我们的管道提供可操作的治疗信息的潜力。版权所有 © 2024 作者。由爱思唯尔公司出版。保留所有权利。

干细胞在体外定向分化成软骨并在原位再生软骨，但存在脱靶分化和肥大倾向。在这里，我们从携带 COL2A1mCherry 和 COL10A1eGFP 双报告基因的人类扩增多能干细胞 (hEPSC) 中生成了软骨类器官系统，从而能够实时监测软骨形成和肥大。在筛选了 2,040 种 FDA 批准的药物后，我们发现 α-肾上腺素受体 (α-AR) 拮抗剂，尤其是酚妥拉明，可以刺激软骨形成但抑制肥大，而 α2-AR 激动剂则减少软骨形成并诱导肥大。酚妥拉明可预防 hEPSC 软骨类器官和人类软骨外植体模型中的软骨变性，并刺激微骨折激活的内源性骨骼干细胞进行透明样软骨再生，而不会发生原位纤维化变性。从机制上讲，α2-AR 信号通过环磷酸鸟苷 (cGMP) 依赖性分泌性白细胞蛋白酶抑制剂 (SLPI) 的产生诱导肥厚性变性。 SLPI 缺失的软骨类器官具有抗退变性，有助于大软骨缺损的愈合。最终，靶向 α2-AR/SLPI 是一种有前途且临床可行的策略，通过促进软骨形成和抑制肥大来再生软骨。版权所有 © 2024 Elsevier Inc. 保留所有权利。