生物制药的发酵、纯化、冷藏和运输成本高，保质期短，无菌运输方式也是生产者和消费者共同关心的问题。由于 FDA 现已批准植物细胞用于大规模、具有成本效益的生物制药生产，转质体叶绿体的分离和冻干可以消除对局限性的担忧。 DARPins 是经过改造的小型单结构域蛋白，被选择以高亲和力和特异性结合 HER2。 HER2 是一种癌基因，参与某些癌症中的异常细胞生长，也是癌症免疫治疗的靶分子。在这项研究中，我们报道了 DARPin G3 在冻干转质体烟草叶和叶绿体中的长期稳定性和功能性。对室温下保存长达九个月的冻干叶子和叶绿体进行的蛋白质印迹分析表明，DARPin G3 蛋白是稳定的并保持正确的折叠。叶子和分离叶绿体的冻干使 DARPin G3 蛋白浓度分别增加 16 倍和 32 倍。 HER2 结合测定表明，叶绿体制造的 DARPin G3 在整个研究过程中，在室温下超过 9 个月的时间里，在冻干叶子材料中可以保持其稳定性和结合活性，而不会出现任何亲和力下降。表达 DARPin G3 的叶绿体的冻干将进一步降低成本并简化下游加工、纯化和储存。考虑到九个月后 DARPin G3 占用的空间以及下游提取和纯化，冻干叶绿体的压缩包比冻干转质体叶更有效。这些方法有利于这些化合物的任何相关配制实践，以满足任何以需求为导向的需求。© 2023。BioMed Central Ltd.，Springer Nature 的一部分。

子宫内膜异位症是育龄妇女常见的慢性疾病。病程可能具有高度侵袭性，需要大量手术。子宫内膜异位症的病因仍然难以捉摸，但其高遗传力已得到证实。已经确定了几个低外显率易感位点，但高风险易感性仍未确定。众所周知，子宫内膜异位症会增加上皮性卵巢癌的风险，尤其是子宫内膜样癌和透明细胞类型的癌症。在这里，我们分析了一个芬兰家庭，其中四名女性被诊断患有经手术证实的、症状严重的子宫内膜异位症，其中两名患者还患有高级别浆液性癌。全外显子组测序揭示了三种与子宫内膜异位症分离的罕见候选易感变异。变体是 FGFR4 中的 c.1238C>T, p.(Pro413Leu)、NALCN 中的 c.5065C>T, p.(Arg1689Trp) 和 NAV2 中的 c.2086G>A, p.(Val696Met)。计算机工具预测的唯一有害变体是 FGFR4 中的变体。对 92 名芬兰子宫内膜异位症患者和 19 名子宫内膜异位症-卵巢癌患者的变异体进行进一步筛查，没有发现其他携带者。组织病理学、阳性p53免疫染色和遗传分析支持该家族中两种肿瘤的高级别浆液性亚型。在这里，我们提供FGFR4、NALCN和NAV2作为家族性子宫内膜异位症的新高风险候选基因。我们的结果也支持子宫内膜异位症与高级别浆液性癌的关联。需要进一步的研究来验证这些发现并揭示子宫内膜异位症的确切发病机制。阐明子宫内膜异位症的遗传背景可明确该疾病的病因，并为快速诊断和个性化治疗提供机会。© 2023。BioMed Central Ltd.，Springer Nature 旗下公司。

液体活检，特别是无细胞 RNA (cfRNA)，由于其可获取性和提供的信息丰富，已成为一种有前途的非侵入性诊断工具，用于治疗包括癌症在内的各种疾病。一个关键领域是血液中 cfRNA 的组成和细胞起源，以及致癌过程中 cfRNA 转录组景观的变化。研究这些变化可以深入了解血液中组织变化的表现，从而有可能制定更有效的诊断策略。然而，不同研究中这些发现的一致性及其临床实用性仍有待充分阐明，这凸显了该领域进一步研究的必要性。在这项研究中，我们分析了来自四项不同研究的 350 多个血液样本，调查了细胞类型的贡献肝癌中的 cfRNA 转录组景观。我们发现血液中肝细胞比例的增加是大多数研究的一致特征，并且可以有效地用于对癌症和健康样本进行分类。此外，我们的分析表明，除了肝细胞外，肝内皮细胞特征在观察到的变化中也很突出。通过将细胞比例与已建立的标记物的分类性能进行比较，我们证明细胞比例可以像现有标记物一样有效地区分癌症和健康样本，甚至在与这些标记物结合使用时可以增强分类效果。我们对肝细胞类型组成的综合分析血液的变化揭示了强大的影响，有助于从健康样本中分类癌症。考虑到数据集的异质性和样本的病因学差异，这一点尤其值得注意。此外，观察到的不同研究结果的差异强调了未来研究中综合和比较方法的重要性，以确定研究结果的一致性和稳健性。这项研究有助于了解肝癌中的 cfRNA 组成，并强调了细胞解卷积在液体活检中的潜力。© 2023。BioMed Central Ltd.，Springer Nature 旗下公司。

血脑屏障（BBB）是一种高度选择性的屏障，可确保中枢神经系统（CNS）的稳态环境。血脑屏障功能障碍、炎症和免疫细胞浸润是许多中枢神经系统疾病的标志，包括多发性硬化症和中风。与生理相关的人体血脑屏障体外模型对于提高我们对其在健康和疾病中的功能的理解、识别新的药物靶点以及评估潜在的新疗法至关重要。我们提出了一种 BBB 芯片模型，包含在微流体平台中培养的人脑微血管内皮细胞 (HBMEC)，该平台允许并行培养 40 个芯片。在每个芯片中，灌注的 HBMEC 容器以无膜方式在细胞外基质凝胶上生长。将芯片上的 BBB 暴露于不同浓度的促炎细胞因子肿瘤坏死因子 α (TNFα) 和白细胞介素 1 β (IL-1β) 中以模拟炎症。通过评估芯片上 BBB 的屏障功能、细胞形态和细胞粘附分子的表达来研究炎症条件的影响。原代人类 T 细胞通过芯片上 BBB 的内腔灌注，以研究 T 细胞粘附、外渗和迁移。在炎症条件下，芯片上的 BBB 显示出跨内皮电阻 (TEER) 降低、荧光素钠渗透性增加以及浓度依赖性方式的异常细胞形态。此外，我们观察到细胞粘附分子的表达增加以及伴随的单核细胞粘附。 T 细胞从发炎的血管中渗出，并向 C-X-C 基序趋化因子配体 12 (CXCL12) 梯度迁移。那他珠单抗是一种阻断极晚期抗原 4 (VLA-4) 的抗体药物，用于治疗多发性硬化症，T 细胞粘附显着降低，迁移趋势减少。总之，我们展示了人类血脑屏障的高通量微流体模型，可用于模拟神经炎症并评估抗炎和屏障恢复干预措施以对抗神经系统疾病。版权所有 © 2023 Nair, Groenendijk, Overdevest, Fowke, Annida,莫塞林、德弗里斯和韦弗斯。

可修饰的宿主因子已被证明有望增强免疫治疗的反应。在本期中，Savage 等人。研究了使用有氧运动来增强黑色素瘤小鼠模型的抗肿瘤免疫力。他们表明，跑步机跑步可以改善肿瘤脉管系统，并通过 ERK5 依赖性机制改变肿瘤的 T 细胞和骨髓细胞浸润，这为支持运动的免疫介导抗肿瘤作用提供了越来越多的证据。参见 Savage 等人的相关文章，第 17 页。 1168 (3).©2023 美国癌症研究协会。

肿瘤特异性新表位是癌症免疫治疗中有希望的靶标。然而，功能性肿瘤特异性新表位的鉴定仍然具有挑战性。除了最常见的来源，单核苷酸变异 (SNV) 之外，选择性剪接 (AS) 代表了新表位的另一种丰富来源，可用于低 SNV 的癌症，例如葡萄膜黑色素瘤 (UM)。 UM 是最常见的成人眼部恶性肿瘤，由于缺乏有效的治疗方法，临床结果不佳。最近的研究揭示了利用肿瘤新表位来治疗 UM 的前景。之前的研究主要集中在与剪接因子 3b 亚基 1 (SF3B1) 突变相关的新表位靶标，剪接因子 3b 是一个关键的剪接因子。然而，对于独立于 SF3B1 状态的患者常见的新表位知之甚少。为了鉴定 AS 衍生的新表位，无论 SF3B1 状态如何，我们在此使用了综合的 Nanopore 长读长测序方法来阐明 UM 中 AS 和新亚型的情况。我们还进行了高分辨率质谱分析以进一步验证候选新表位的存在，并使用 AlphaFold2 算法分析了它们的结构。我们通过实验评估了这些新表位的抗肿瘤作用，发现它们通过刺激干扰素（IFN的产生和激活基于T细胞的UM肿瘤杀伤来诱导强大的免疫反应）。这些结果为独立于SF3B1和SF3B1的UM特异性新表位提供了新的见解。通过针对这些可操作的新表位来开发治疗方法奠定基础。

增强 T 细胞对胶质母细胞瘤 (GBM) 肿瘤的浸润已被证明具有挑战性，但对于提高这种致命癌症患者的免疫治疗效果仍然至关重要。在本期中，Qin、Huang、Li 及其同事发现，抑制癌症干细胞驱动的血管形成是增强 GBM 免疫治疗的一个有希望的靶点。参见Qin、Huang、Li 等人的相关文章，第17 页。 1351 (2).©2023 美国癌症研究协会。

肿瘤内不变自然杀伤T（iNKT）细胞的功能障碍阻碍了其抗肿瘤功效，但其潜在机制以及与内源性抗原引发的关系仍有待探索。在此，我们报告抗原引发导致代谢重编程和表观遗传重塑，从而导致 iNKT 细胞功能重编程，其特征是再刺激时细胞因子反应有限，但具有高细胞毒性。从机制上讲，抗原引发的 iNKT 细胞中氧化磷酸化 (OXPHOS) 受损会在通过减少 mTORC1 激活进行再刺激时抑制 TCR 信号传导以及糖酵解升高，从而导致细胞因子产生受损。然而，抗原引发的 iNKT 细胞中的代谢重编程与其增强的细胞毒性无关。相反，表观遗传重塑解释了它们的颗粒酶的高表达。值得注意的是，由于肿瘤中的内源抗原引发，瘤内 iNKT 细胞与抗原引发的 iNKT 细胞具有相似的代谢重编程和功能重编程，因此 ZLN005 恢复瘤内 iNKT 细胞中的 OXPHOS 成功增强了其抗肿瘤反应。我们的研究破译了抗原引发诱导的代谢重编程和表观遗传重塑对瘤内 iNKT 细胞功能的影响，并提出了一种通过靶向细胞代谢来增强基于 iNKT 细胞的抗肿瘤免疫治疗疗效的方法。

癌症免疫疗法的进步正在提高许多不同癌症类型的治疗成功率。尽管如此，大多数肿瘤未能做出反应。年龄是大多数癌症的最大风险，全球人口中位年龄正在上升。年龄的增长与免疫细胞类型、丰度和功能的多种变化有关，而不是这些指标的简单下降，其后果仍未完全确定。我们对宿主年龄对免疫治疗机制、疗效和不良事件影响的理解仍然不完整。需要更深入地了解年龄对所有这些领域的影响。大多数癌症免疫治疗临床前研究都检查年轻受试者，未能评估年龄的贡献，考虑到年龄对免疫细胞以及介导癌症免疫监视和免疫治疗功效的因素的已知重要性，这是一个显着的缺陷。值得注意的是，一些癌症免疫疗法对老年宿主比年轻宿主更有效，而另一些癌症免疫疗法尽管对年轻人有效，但仍失败。在这里，我们回顾了目前对年龄对免疫和相关非免疫细胞、肿瘤微环境、癌症免疫治疗和相关不良反应的影响的理解。我们强调重要的知识差距，并建议需要深入研究的领域，包括癌症免疫监测、治疗反应、不良事件结果及其缓解措施。©2023 美国癌症研究协会。

β2-微球蛋白 (B2M) 是 MHC I 类分子的关键成分，是向 T 细胞呈递肿瘤抗原所必需的。它的缺失导致对免疫检查点阻断（ICB）疗法的获得性抵抗。然而，已有充分记录的 B2M 灭活肿瘤对 ICB 做出反应的案例，这证明了如何对没有表面 MHC I 类的肿瘤产生抗肿瘤免疫反应的研究。我们在三种具有不同基线 MHC 的小鼠模型中敲除了 B2M I 类表达和抗程序性死亡受体 (PD-1) 治疗的敏感性，并分析了免疫反应。没有 B2M 的 MC38 和 YUMMER2.1 单独响应抗 PD-1 或​​与 IL2 激动剂一起响应，这是由 CD4 T 细胞和自然杀伤 (NK) 细胞介导的。不表达 B2M 的更具攻击性的 B16 仅对 IL2 激动剂有部分反应，这取决于 NK 细胞。在分析来自接受 PD-1 阻断疗法的黑色素瘤患者的近 300 例治疗前活检样本时，我们发现 B2M 突变或纯合性丢失不常见，但杂合性 (LOH) 丢失或拷贝数增加则更为常见。 B2M LOH 在对治疗无反应的患者的活检中富集，并且这些活检更频繁地被活化的 NK 细胞浸润。我们的结论是，在缺乏 B2M 的情况下，CD4 T 细胞和 NK 细胞的激活可以介导对 PD-1 阻断疗法的小鼠模型的反应。此外，在人类黑色素瘤中，部分 B2M 缺失后，肿瘤内存在活化的 NK 细胞，可能会通过低表面 MHC I 类表达来选择阻止肿瘤逃逸。